Effect of polycaprolactone nanocapsules loaded with essential oils on biofilm formation by Staphylococcus aureus strains isolated from bovine mastitis cases

Abstract Bovine infectious mastitis is largely resistant to antibacterial treatment, mainly due to mechanisms of bacterial resistance in the biofilms formed by Staphylococcus aureus. Melaleuca (MEO) and citronella essential oils (CEO) are promising agents for reducing or eliminating biofilms. Free melaleuca oil presented a medium Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of 0.625% and a Minimum Bactericidal Concentration (MBC) of 1.250%, while free citronella oil showed medium MIC and MBC of 0.313%. Thus, free CEO and MEO demonstrate bacteriostatic and bactericidal potential. We generated polymeric nanocapsules containing MEO or CEO and evaluated their efficacy at reducing biofilms formed by S. aureus. Glass and polypropylene spheres were used as test surfaces. To compare the responses of free and encapsulated oils, strains were submitted to 10 different procedures, using free and nanoencapsulated essential oils (EOs) in vitro. We observed no biofilm reduction by MEO, free or nanoencapsulated. However, CEO nanocapsules reduced biofilm formation on glass (p=0.03) and showed a tendency to diminish biofilms on polypropylene (p=0.051). Despite nanoencapsulated CEO reducing biofilms in vitro, the formulation could be improved to modify the CEO component polarity and, including MEO, to obtain more interactions with surfaces and the biofilm matrix

Changes in somatic cell count, composition and cytokine levels in milk from cows with mastitis due to mixed infections

Mastitis is a mammary gland inflammation that is very common worldwide, mostly caused by bacteria, and causes enormous economic losses. Many microorganisms cause this disease. The most common causes of mastitis by these microorganisms are Staphylococcus aureus (S. aureus), Escherichia coli (E. coli) and Streptococcus agalactiae (S. agalactiae). The anti-inflammatory properties of transforming growth factor (TGF)-ß include: 1) limiting interferon (IFN)-γ production; 2) increasing the expression of the interleukine (IL)-1 receptor antagonist; 3) inhibiting macrophage production of chemokines, pro-inflammatory cytokines, nitric oxide, and reactive oxygen intermediates; and 4) increasing macrophage clearance of bacterial debris and damaged parenchymal cells. It is stated that cytokines and milk composition change in case of mastitis. In this study, it was aimed to reveal the changes in milk TGF-ß1 and Tumor necrosis factor (TNF)-α concentrations and milk composition in mixed infections caused by three pathogens causing mastitis. In this study, milk samples from 90 cows were divided into 5 groups. Tumor necrosis factor (TNF)-α and TGF-ß1 concentrations and milk composition were determined in these milk samples. The California Mastitis Test (CMT) was applied to the cows included in the study and scoring was done. According to the CMT results of the milk samples taken, CMT(-) cows were included in group 1 (n = 22). Those with the CMT(+) were sent to the microbiology laboratory for analysis within 2 h. After the bacteria was determined, combination groupings were formed. Group 2 (n = 17), in which S. aureus and E. coli grew together, group 3 (n = 21), in which S. aureus and S. agalactiae grew together, group 4 (n = 8), in which S. agalactiae and E. coli grew together in milk samples, and milk samples without any bacterial growth in CMT (+) formed group 5 (n = 22), respectively. Somatic cell count was measured with the DeLaval Cell Counter® (Cell Counter DCC) device. Mineral matter, fat, protein, lactose, electrical conductivity and specific gravity were measured in milk samples using Lactoscan Milk Analyzer (Milkotronic/EUROPE). Milk samples were then stored at -80°C to measure TGF-ß1 and TNF-α. Tumor necrosis factor-α and TGF-ß1 concentrations in milk samples were measured using ELISA kits (Sunred Biological Technology). Changes in milk TNF-α and TGF-ß1 concentration and milk composition were determined in milk samples with mastitis caused by mixed infection. The TNF-α concentration of group 4 was higher than the other groups. On the other hand, the highest concentration of TGF-ß1 was found in group 2. While the number of somatic cells in group 1 was lower than in groups 2, 3, and 4, there was no statistical difference between groups 1 and 5. The lowest milk fat ratio was found in group 1, and it was found to be statistically lower than groups 2, 3, and 4. While the rate of solid-non-fat of group 1 increased compared to groups 2 and 3, the highest protein ratio was found in groups 1 and 5. There was no difference between the 5 groups in terms of mineral matter ratios. While the specific gravity was highest in group 1, there was no statistical difference between the other 4 groups. Overall, it was concluded that there was an increase in TNF-α and TGF-ß1 concentrations and a change in milk composition in samples with bacterial growth.(AU)

Inhibition of the growth of major mastitis-causing pathogens by non-aureus Staphylococcus isolates using the cross-streaking method / Comunicação: Inibição do crescimento dos principais patógenos causadores de mastite por isolados de estafilococos não aureus pelo método cross-streaking

O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de estafilococos não aureus (NAS) isolados de diferentes nichos ecológicos (leite, ambiente e ápice do teto), associados a vacas leiteiras, de inibir os principais agentes etiológicos da mastite bovina (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Escherichia coli). Neste estudo, 38 isolados NAS de diferentes nichos ecológicos foram avaliados quanto à capacidade de inibir o crescimento in vitro de importantes patógenos causadores de mastite pelo método cross-streaking. No total, 19 (50%) isolados de NAS (oito isolados de S. chromogenes, 10 de S. fleurettii e um de S. haemolyticus) apresentaram inibição contra os principais patógenos causadores de mastite. No entanto, a inibição dos patógenos causadores da mastite bovina por isolados de NAS foi maior contra bactérias Gram-positivas. Além disso, o presente estudo não sugeriu que os nichos ecológicos influenciam a capacidade do NAS de inibir os principais patógenos causadores da mastite bovina. Com base nesses resultados, concluiu-se que certos isolados de NAS apresentam potencial efeito protetor contra os principais patógenos da mastite, pelo menos in vitro.(AU)

Avaliação da ocorrência de mastite bovina através do CMT em uma propriedade localizada no município do Cantá/RR / Evaluation of the occurrence of bovine mastitis through the CMT in a property located in the Cantá/RR municipality

Neste trabalho, objetivou-se verificar a ocorrência de mastite em vacas sem raça definida de uma propriedade do município do Cantá. Foram avaliados onze animais, sendo os quesitos observados: escore corporal, idade, número de crias, produção leiteira, lesão de casco e, por fim, se há ou não a presença da mastite. A maioria das vacas apresentou fraca positividade para a enfermidade, sendo que apenas uma resultou em forte positivo em um dos tetos. Com isso, é possível concluir que a propriedade onde se realizou a pesquisa não positivou a mastite em seu pior grau, visto que há uma baixa produção individual das vacas e a presença do bezerro ao pé.

Atividade antibiofilme de substâncias de Croton urucurana em Staphylococcus aureus isolado de mastite bovina / Antibiofilm activity of Croton urucurana compounds against Staphylococcus aureus isolated from mastitis in dairy cattle

A mastite bovina é a enfermidade que causa maior impacto na produção leiteira, sendo o microrganismo Staphylococcus aureus o mais prevalente. Este gênero possui a capacidade de produzir biofilmes que é um importante mecanismo de resistência aos antibióticos. Considerando a capacidade terapêutica das plantas, a espécie Croton urucurana, nativa do Cerrado, foi alvo do presente estudo, que teve como objetivo avaliar a atividade antibiofilme in vitro do extrato vegetal e substâncias isoladas desta espécie, frente Staphylococcus aureus, isolados de leite de vacas com mastite, bem como dos antibióticos gentamicina e vancomicina. A atividade antibiofilme foi avaliada por meio do cristal violeta e da contagem de unidades formadoras de colônia. As imagens foram obtidas por microscopia eletrônica de varredura. O extrato bruto e frações de C. urucurana apresentaram atividade antibiofilme superior à gentamicina e semelhante à vancomicina, enquanto a substância isolada α-Costol foi significativamente mais ativa quando comparada aos demais tratamentos avaliados, reduzindo cerca de 6 ciclos logarítmicos da população bacteriana em biofilme. Conclui-se que os fitocomplexos e a substância α-Costol isolados de Croton urucurana são promissores no combate a um dos principais agentes etiológicos da mastite bovina.(AU)

Mastitis in dairy cattle is the disease that impacts dairy production the most; Staphylococcus aureus is the main causative agent of this condition. The genus Staphylococcus has the ability to produce biofilms, an important mechanism of antibiotic resistance. Bearing in mind that plants have therapeutic action, this study investigated the in vitro antibiofilm activity of the plant extract and compounds isolated from the species Croton urucurana, native to the Brazilian Cerrado, against Staphylococcus aureus isolated from the milk of cows with mastitis, as well as the antibiotic gentamycin and vancomicyn. The antibiofilm activity was evaluated by means of violet crystal and the counting of Colony Forming Units. The images were obtained by scanning electron microscopy. The C. urucurana crude extract and fraction displayed better antibiofilm effect than gentamycin; their antibiofilm action was similar to the action of vancomycin. Compared with all the assessed treatments, the isolated compound α-Costol was significantly more active it reduced six logarithmic cycles of the bacterial population composing the biofilm. The phytocomplexs and the α-Costol substance isolated from Croton urucurana are promising in the fight against one of the main etiological agents of bovine mastitis.(AU)

Estudo longitudinal da mastite subclínica e produção de leite em um rebanho mestiço Holandês-Zebu criado em sistema semi-intensivo / Longitudinal study of subclinical mastitis and milk production on crossbred Holstein x Zebu cattle, housed in a semi-intensive system

Acompanhou-se durante 15 meses um rebanho leiteiro, composto por diferentes graus de sangue Holandês-Zebu (HZ), em sistema semi-intensivo. Objetivou-se avaliar o comportamento longitudinal da contagem de células somáticas (CCS) e a influência da mastite subclínica (MS) na produção total e no pico de produção de leite de vacas mestiças HZ. Inicialmente, coletaram-se amostras de leite individual para análise microbiológica, a fim de identificar o perfil de patógenos causadores de mastite. Realizou-se mensalmente a CCS com o intuito de monitorar a MS. Semanalmente, avaliou-se a produção de leite. Para avaliar o efeito da CCS sobre a produção de leite, as vacas foram divididas em dois grupos, <200.000 e ≥200.000 células/mL...

A herd of dairy cattle with different crossbreeding Holstein x Zebu (HZ), housed in a semi-intensive production system, was monitored for 15 months. We aimed to evaluate the longitudinal behavior of somatic cell count (SCC) and the influence of subclinical mastitis (SM) on the milk yield and on the peak yield of crossbred HZ dairy cows. Initially, individual milk samples were collected for microbiological analysis for identification of mastitis pathogens. The SCC was performed monthly to monitor subclinical mastitis. Additionally, milk production was evaluated weekly. To evaluate the effects of SCC on milk production, the cows were identified as falling into two groups: <200.000 and ≥200.000 cells/mL...

Perfil de sensibilidade de células sésseis e planctônicas de Escherichia coli a antimicrobianos usados no tratamento da mastite bovina / Sensitivity profile of planktonic and sessile cells of Escherichia coli to antimicrobial used in the treatment of bovine mastitis

Escherichia coli é um micro-organismo altamente adaptativo e sua habilidade em formar biofilmes pode ser fundamental na resistência a tratamentos com antimicrobianos. A avaliação da concentração mínima inibitória (CMI) vem sendo utilizada para verificar a sensibilidade dos micro-organismos aos antimicrobianos. Entretanto, quando se avaliam células sésseis, a concentração do antimicrobiano requerido para erradicação do biofilme é maior do que a determinada pela CMI. Objetivou-se comparar as CMI com as concentrações mínimas de erradicação de biofilmes (CMEB) de antimicrobianos usados no tratamento da mastite em 27 isolados de E. coli produtores de biofilmes provenientes de mastite. Os isolados foram submetidos a testes de sensibilidade a antimicrobianos usados no tratamento da mastite, tanto para células planctônicas, por meio da CMI, quanto para células sésseis, pela avaliação da CMEB. Os resultados revelaram uma alta sensibilidade: apenas quatro (14,8%) isolados obtiveram valores da CMI elevados, variando de 4 a 10µg/mL, sendo classificados como resistentes. Para os demais isolados (85,2%), os valores foram menores, variando de 0,125 a 2µg/mL, classificados como sensíveis. A avaliação de CMEB indicou que a concentração dos antimicrobianos necessária para eliminar as células sésseis variou de 100µg/mL a 500µg/mL. Os valores de CMEB foram significativamente maiores nos isolados grandes e moderados produtores de biofilmes em relação aos isolados fracos produtores de biofilmes (p<0,001). Não houve correlação entre os valores de CMEB e CMI (p>0,05). A escolha da terapêutica antimicrobiana correta para o tratamento de infecções intramamárias em bovinos relacionadas com a produção de biofilmes parece exigir a aplicação de testes mais específicos. Testes de susceptibilidade antimicrobiana baseados apenas em valores de CMI mostraram-se ineficazes em determinar com precisão a susceptibilidade das células bacterianas sésseis.

Escherichia coli is a highly adaptive microorganism. Its ability to form biofilms may be critical for resistance to antimicrobial treatments. Evaluation of minimum inhibitory concentration (MIC) has been used to check the sensitivity of microorganisms to antibiotics, however, when evaluating sessile cells, the required antibiotic concentration to eradicate biofilm is greater than determined by MIC. This study aimed to compare MIC with minimum biofilm eradication concentration (MBEC) of antimicrobials used in mastitis treatment in 27 E. coli biofilm producers isolates from mastitis. Isolates were tested for sensitivity to antimicrobials used in mastitis treatment, for both planktonic cells (by CMI) and sessile cells (by MBEC). The results revealed high sensitivity: only four (14.8%) isolates showed high MIC values, ranging from 4 to 10g/mL and they were classified as resistant. All other isolates (85.2%) showed lower values, ranging from 0.125 to 2mg/mL, and they were classified as sensitive. Evaluation of MBEC indicated that concentration of antimicrobial needed to remove sessile cells ranged from 100mg/mL to 500mg/mL. MBEC values were significantly higher in large and moderate biofilm producers isolates regarding weak biofilm producers isolates (p<0.001). There was no correlation between MBEC and CMI values (p>0.05). The correct choice of antimicrobial therapy for treatment of mammary infections in cattle related to biofilm production seems to require application of more specific tests. Antimicrobial susceptibility testing based only on MIC values proved ineffectiveness to accurately determination the susceptibility of sessile bacterial cells.

Effects of environmental modification on mastitis occurrence and hormonal changes in Holstein cows / Efeito da modificação ambiental sobre a ocorrência de mastite e alterações hormonais de vacas Holandesas

The purpose of this research was to evaluate the effects of evaporative cooling in freestall on mastitis occurrence, milk production, and composition, as well as cortisol, T3 (triiodothyronine), and T4 (thyroxin) levels in lactating dairy cows. Twenty-eight multiparous cows averaging 70 ± 10 day postpartum were used in four treatments from January to March 2003. The treatments were: Day (cooling from 7:00 a.m. to 7:00 p.m.); Night (cooling from 7:00 p.m. to 7:00 a.m.); 24-hour (cooling 24-hour); and Control (no cooling). Wired cup test was used for clinical mastitis diagnosis, and the California Mastitis Test (CMT) was used to identify subclinical mastitis. Blood and milk samples were taken weekly for microbiological and hormonal analyses. The cortisol levels were higher than normal values in all treatment groups, suggesting stress conditions, but T3 and T4 levels remained normal in all groups. The occurrence of subclinical mastitis was lower in Day and Night groups than in Control and 24-hour groups. Regarding the microbiological analyses, in all groups the isolation of Corynebacterium sp. from milk samples increased while negative coagulase staphylococci (CNS) declined as etiological agents of subclinical mastitis. However, in Day and 24-hour groups, coagulase positive staphylococci (CPS) increased mainly Staphylococcus aureus (49.8% and 47.7% respectively). The Night group showed a decrease in subclinical mastitis occurrences. Our data indicate that all animals subjected to treatments presented high levels of cortisol, indicating a stress condition. The Night treatment presented a reduction in microbial isolation, suggesting a reduced susceptibility to mastitis.

O trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência do sistema de resfriamento adiabático evaporativo, acionado em diferentes horários, em instalação do tipo freestall e seus reflexos sobre a ocorrência de mastite, produção e composição do leite e respostas hormonais de vacas em lactação. Foram utilizadas 28 vacas em lactação (70±10 dias), multíparas, das raças Holandesa Preta e Branca e Pardo Suíça, com produção média diária de 23±2,3 kg leite/dia. O período experimental de 56 dias teve início em 20 de janeiro de 2003. Os tratamentos foram: Controle (sem resfriamento); Dia (resfriamento 7 as 19 h); Noite (resfriamento 19 às 7 h) e 24 horas (resfriamento durante 24 h). A temperatura de bulbo seco (TBS), umidade relativa do ar (UR) e a temperatura de globo negro (TGN) foram mensuradas ao longo das 24 horas. A ordenha foi realizada às 7 h e 19 h. Amostragens semanais de leite e sangue foram realizadas para análise da composição do leite (gordura, proteína, lactose e contagem de células somáticas) e determinações hormonais de cortisol, tiroxina (T4) e triiodotironina (T3). Para avaliação da ocorrência de mastite clínica e subclínica foram feitos exames semanais de TAMIS (caneca de fundo preto) e California Mastitis Test (CMT). Foram colhidas amostras de leite de todos os quartos para identificação microbiológica dos agentes causais da mastite. O tratamento Dia diminuiu (P<0,05) a temperatura do freestall em 5,3°C às 12h e em 3,5°C às 14h em relação ao grupo Controle. A umidade relativa esteve elevada (P<0,05) às 7h no tratamento Noite e às 12h, 14h e 21h no tratamento Dia. Os maiores valores de ITU foram registrados no tratamento Noite às 12h, 14h e 21h. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos (P>0,05) para a produção e composição do leite. Nos animais do tratamento Os níveis de cortisol mostraram-se acima (P<0,05) dos níveis normais em todos os tratamentos. Já os teores de T3 e T4 estiveram dentro da faixa de normalidade. Na fase pré-experimental a maior frequência de isolamento bacteriano foi para Staphylococcus coagulase negativa. No tratamento noite e dia, houve uma diminuição na proporção de casos positivos de mastite subclínica da fase pré-experimental em relação à última semana da fase experimental. Na última semana da fase experimental houve uma diminuição de Staphylococcus coagulase negativa e aumento da ocorrência de Corynebacterium sp.

Fatores de risco para mastite e qualidade do leite no município de Altônia-PR / Risk factors for mastitis and milk quality in the county of Altonia_PR / Factores de riesgo para mastitis y calidad de la leche en el municipio de Altonia-PR

Esta pesquisa teve como objetivo determinar a incidência da mastite, fatores de risco associados à mastite e avaliar a qualidade do leite no município de Altônia. Foram avaliadas 24 propriedades em um total de 248 vacas, nas quais se realizaram procedimentos nas propriedades, o teste da caneca telada, o California Mastitis Test, a coleta para exames laboratoriais e aplicação do questionário. Desse modo, 82 animais apresentaram reações positivas ao Califórnia Mastitis Test e destes 54 foram positivos ao exame microbiológico, perfazendo um índice de 21,80% de mastite. No exame microbiológico a maior prevalência foi de Staphylococcus aureus com 51,85%, seguida por Staphylococcus coagulase negativo (29,63%), Streptococcus dysgalactiae (5,56%); acompanhado de Staphylococcus coagulase positivo VP negativo (5,56%) e Corynebacterium sp. (5,56%). A mediana da contagem de células somáticas relacionado ao exame microbiológico para o Staphylococcus aureus foi 1.650 (CCS x 10³), e para o Staphylococcus coagulase negativo 1.324,5 (CCS x 10³). Em se tratando dos constituintes do leite, também não foram encontradas diferenças significativas em relação aos exames positivos dos principais isolados e negativos no exame microbiológico. Os fatores de risco com resultado estatisticamente significativo foi a não realização do pós-dipping; descarte de animais por mastite e a lavagem dos tetos com água. Considerando a detecção das falhas produtivas, medidas de controle estão sendo desenvolvidas para a melhoria da qualidade do leite no município e sanidade do rebanho.

This research aimed to determine the incidence of mastitis risk factors associated with mastitis and evaluate the quality of milk in the city of Altonia. We evaluated 24 properties for a total of 248 cows, which were performed procedures in the properties, the test mug screened, the California Mastitis Test, collection for laboratory tests and the questionnaire. 82 animals showed positive reactions to the California Mastitis Test and of these 54 were positive for microbiological examination, for a rate of 21.80% of mastitis. Microbiological examination was a higher prevalence of Staphylococcus aureus with 51.85%, followed by coagulase-negative Staphylococcus (29.63%), Streptococcus dysgalactiae (5.56%), followed by Staphylococcus coagulase positive VP negative (5.56%) and Corynebacterium sp. (5.56%). The median somatic cell counts related to microbiological test for Staphylococcus aureus was 1.650 (CCS x 10 ³), and coagulase-negative Staphylococcus 1324.5 (CCS x 10 ³). In the case of milk constituents, also found no significant differences in relation to the examination of the main positive and negative isolates microbiological examination. Risk factors with a statistically significant result was not performing post-dipping; disposal of animal by mastitis and washing and washing of roofs with water. Considering the detection of failures productive, control measures are being developed to improve the quality of milk in the city and health of the herd.

Esta investigación tuvo como objetivo determinar la incidencia de mastitis, factores de riesgo asociados a la mastitis y evaluar la calidad de la leche en el municipio de Altônia. Se evaluó 24 propiedades con un total de 248 vacas, en las cuales se realizaron procedimientos en las propiedades, el test de la jarra con tela, el California Mastitis Test, la recopilación para exámenes de laboratorio y aplicación del cuestionario. Así, 82 animales mostraron reacciones positivas al California Mastitis Test y de estos 54 fueron positivos al examen microbiológico, con una tasa de 21,80% de mastitis. En el examen microbiológico la mayor prevalencia fue de Staphylococcus aureus con 51,85%, seguido por Staphylococcus coagulase negativo (29.63%), Streptococcus dysgalactiae (5,56%); seguido de Staphylococcus coagulase positivo VP negativo (5.56%) y Corynebacterium sp. (5,56%). La mediana del contaje de células somáticas relacionado al examen microbiológico para Staphylococcus aureus fue 1,650 (CCS x 10 ³), y para Staphylococcus coagulase negativo 1324.5 (CCS x 10 ³). En el caso de los componentes de la leche, también no se encontraron diferencias significativas en relación a los exámenes positivos de los principales aislados y negativos en el análisis microbiológico. Los factores de riesgo con resultado estadísticamente significativo fue la no realización del pós-dipping, descarte de animales por mastitis y el lavaje de los techos con agua. Considerando la detección de fallos productivos, medidas de control están siendo desarrolladas para mejorar la calidad de la leche en el municipio y la salud del rebaño.

Isolation and identification of main mastitis pathogens in Mexico / Isolação e identificação dos micróbios patogênicos principais da mastite em México

The present work is a large epidemiological study aiming to detect the prevalence of subclinical mastitis and to investigate the major udder pathogens in Jalisco State, western Mexico. For this purpose, 2205 dairy cows, representing 33 Mexican dairy herds, were involved. Of 2205 cows, 752 mastitic animals were diagnosed and only 2,979 milk samples could be obtained for further investigation. All 2979 milk samples were subjected to California Mastitis Test (CMT) to differentiate clinical cases from subclinical ones where 1996 samples (67 %) reacted positively. Of these, 1087 samples (54.5%) came from cows suffering from clinical cases of mastitis. Bacteriological identification of the causative agents revealed the presence of a major group of pathogens including the Coagulase negative staphylococci (CNS), S.aureus, S.agalactiae, Corynebacterium spp. and Coliform bacteria which were detected in 464 (15.6%), 175 (5.9%), 200 (6.8%), 417 (14%) and 123 (4.1%) of the 2927 investigated quarters, 295 (15.4%), 118 (15.7%), 111 (14.8%), 227 (30.2%) and 109 (14.5%) of the 752 examined cows and in 33 (100%), 22 (66.7%), 19 (57.6%), 30 (90.1%) and 27 (81.8%) of the 33 herds involved, respectively. Other pathogens could be detected in the investigated milk samples such as S. dysgalactiae (0.4%), S.uberis (0.37%), Bacillus spp. (1%), Nocardia spp. (0.6%) und Candida spp. (0.1%). Meanwhile, others were present in a negligible ratio; including the Aerococcus viridans, and Enterococcus spp., Lactococcus lactis, S. bovis.

O trabalho atual é um estudo epidemiológico que objetiva detectar a predominância da mastite subclínica e investigar os micróbios patogênicos principais do úbere no México ocidental. Com esta finalidade, foram utilizadas 2205 vacas leiteiras, representando 33 rebanhos de leiteiras mexicanas. Além dessas 2205 vacas, 752 animais com mastite foram diagnosticados, considerando-se que somente 2979 amostras do leite poderiam ser obtidas para a posterior investigação. Todas as 2979 amostras do leite foram submetidas ao teste da mastite de Califórnia (CMT) para diferenciar casos clínicos dos subclínicos, visto que 1996 amostras (67%) reagiram positivamente. Além dessas, 1087 amostras (54.5%) vieram das vacas que sofrem de casos clínicos de mastite. A identificação bacteriológica dos agentes causais revelou a presença dos Staphylococcus negativos para coagulase (CNS), S. aureus, S. agalactiae, outros spp. Streptococcal, Corynebacterium spp., e as bactérias de coliformes foram detectadas em 464 (15.6%), 175 (5.9%), 200 (6.8%), 109 (3.9%), 417 (14%) e em 123 (4.1%) dos 2927 quartos investigados; em 295 (15.4%), 118 (15.7%), 111 (14.8%), 95 (12.6%), 227 (30.2%) e em 109 (14.5%) das 752 vacas examinadas e, finalmente, em 33 (100%), 22 (66.7%), 19 (57.6%), 30 (90.1%), 30 (90.1%) e em 27 (81.8%) dos 33 rebanhos envolvidos, respectivamente.

Frequência de staphylococcus aureus em casos de mastite bovina subclínica, na região sul do Rio Grande do Sul / Staphylococcus aureus frequency of subclinical bovine mastitis in southern Rio Grande do Sul

A mastite bovina é uma doença importante na exploração leiteira, não apenas pelas perdas econômicas diretas que promove, mas também pelas perdas indiretas e o potencial risco à saúde pública. Dentre as principais causas de infecções intramamárias, destacam-se as bactérias do gênero Staphylococcus spp., sendo que Staphylococcus aureus é o agente etiológico predominante em mastite subclínica. O objetivo desse trabalho foi verificar a frequência de mastite subclínica em oito rebanhos localizados na região Sul do Rio Grande do Sul (Brasil) e a relação da enfermidade com a presença de S. aureus. Adicionalmente, pesquisou-se a presença de S. intermedius e S. hyicus nas amostras de leite obtidas. Para identificação da doença, utilizou-se o California Mastitis Test (CMT). A identificação da espécie de Staphylococcus spp. foi feita em meio de cultura ágar Baird-Parker, com posterior confirmação das colônias suspeitas em coloração de gram, prova de catalase, pesquisa de coagulase livre e pesquisa de termonuclease. A mastite subclínica foi constatada em 53,6% dos animais testados. A presença de Staphylococcus coagulase positiva foi identificada em 12,6% dos animais com mastite subclínica. Nesses mesmos animais, a bactéria identificada como S. aureus foi o agente etiológico presente em 17,6% dos casos. Adicionalmente, pode-se perceber que, dentre o grupo identificado como coagulase positiva, 85,7% corresponderam a S. aureus, enquanto8,5% mostraram características bioquímicas compatíveis com S. intermedius e 5,8% foram consideradas S. hyicus...

Bovine mastitis is an important disease in dairy farming, not only by promoting direct economic losses, but also for indirect losses and the potential risk to public health. The main causes of intramammary infections include the bacteria of the genus Staphylococcus spp., Staphylococcus aureus being the predominant etiologic agent in subclinical mastitis. The aim of this study was to determine the frequency of subclinical mastitis in eight herds from southern Rio Grande do Sul (Brazil) and the relationship of the disease with the presence of S. aureus. In addition, we checked for the presence of S. intermedius and S. hyicus in the milk samples obtained. For identification of the disease, we used the California Mastitis Test (CMT). Identification of Staphylococcus spp. species was made in Barid-Parker agar culture medium, with subsequent confirmation of suspected colonies by way of Gram stain and catalase test along with free-coagulase and thermonuclease research. Subclinical mastitis was identified in 53.6% of animals tested. The presence of coagulase-positive Staphylococcus was identified in 12.6% of animals with subclinical mastitis. In these same animals, bacteria identified as S. aureus were the etiologic agent present in 17.6% of cases. Additionally, it was revealed that among the group identified as coagulase positive, 85.7% corresponded to S. aureus, while 8.5% had biochemical characteristics consistent with S. intermedius and 5.8% were considered S. hyicus...

Proteinograma sérico de bezerros recém-nascidos alimentados com colostro de vacas com mastite / Serum protein concentration in newborn calves fed with colostrum from cows wirh mastitis

O objetivo do presente estudo foi o de avaliar o proteinograma sérico de bezerros alimentados com colostro oriundo de vacas sadias (n = 10 ), com mastite assintomática (n = 10 ) e mastite clínica (n =10 ). As vacas foram alocadas em seus respectivos grupos de acordo com o exame macroscópico da secreção colostral, contagem de células somáticas, CMT e isolamento microbiano. As amostras de sangue dos conceptos foram colhidas logo após o nascimento, 24 e 48 horas após a ingestão do colostro dos quartos infectados e dos sadios. Foi avaliada a concentração de proteína total pelo método do biureto e as concentrações de imunoglobulina A (IgA), imunoglobulina G (IgG), transferrina, albumina e haptoglobina por meio da eletrofoerese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Não foram observadas diferenças entre os grupos nas concentrações de albumina, proteína total e IgA. Os bezerros alimen- tados com colostro de vacas com mastite assintomática e clínica apresentaram teores de haptoglobina superiores aos animais sadios. As concentrações de IgG e transferrina foram significativamente inferiores nos bezerros tratados com colostro de vacas com mastite clínica. Concluiu-se que a ingestão de colostro de quartos sadios e infectados de vacas que pariram com mastite (GII e GIII) não resulta em falha de transferência da imunidade passiva.

The aim of this study was to evaluate the serum protein concentration in newborns fed with colostrum derived from healthy cows (n = 10), cows with subclinical mastitis (n = 10) and cows with clinical mastitis (n = 10). 30 Holstein cows were assigned to their respective groups according to macroscopic examination of colostral secretion, somatic cell count, CMT and presence of bacteria in colostrum samples. Blood samples of the calves were collected immediately after birth, at 24 and 48 hours after ingestion of colostrum. The total protein was measured by the biuret method and the concentrations of immunoglobulin A (IgA), immunoglobulin G (IgG), transferrin, albumin and haptoglobin was determined by sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). No differences were observed amongst groups in the concentrations of albumin, total protein and IgA. In animals from cows with subclinical and clinical mastitis haptoglobin concentrations were higher than those of healthy animals. The concentrations of IgG and transferrin were significantly lower in calves from cows with mastitis. We concluded that the ingestion of colostrum from infected and uninfected glands from cows with mastitis (GII e GIII) is unlikely to be an important contributor to the high rate of failure of passive transfer of immunoglobulins in calves.

Importância do mapeamento e monitoramento do perfil de resistência e detecção dos genes de resistência de Staphylococcus sp. relacionados à mastite bovina / Importance of mapping and monitoring the resistence profile and resistance gene detection of Staphylococcus sp. related to mastitis bovine / Importancia del mapeo y monitore del perfil de resistencia y detección de los genes de resistencia de Staphylococcus sp. relacionados a la mastitis bovina

A mastite é a doença mais importante do gado leiteiro, pois acarreta grandes prejuízos devido a perda da produção, gastos com serviços veterinários e medicamentos. Sua etiologia é diversificada, porém as bactérias são as maiores causadoras da doença, principalmente o Staphylococcus aureus, caracterizando uma mastite contagiosa. A doença causa problemas a saúde pública devido aos resíduos de antibióticos, bactérias e suas toxinas que podem ser eliminadas no leite, além dos prejuízos para a indústria de laticíneos. Para diminuir taxas de infecção e prevenir novas infecções são utilizados antibióticos, tanto no período de lactação, quando necessário, ou no período seco, onde acabam sendo utilizados sem prévia cultura microbiológica e antibiograma. Atualmente são detectados estirpes de Staphylococcus aureus multirresistentes, tanto em ambiente hospitalar (HA-MRSA) como na comunidade (CA-MRSA). A resistência aos antibióticos é expressa devido a mutações de seus genes ou por meio da aquisição de genes de resistência de outras bactérias, da mesma espécie ou não. Inúmeros trabalhos vêm sendo desenvolvidos para caracterizar os fatores de patogenicidade destes dois tipos de estirpes, no intuito de mapear e rastrear as infecções em humanos e animais. Em humanos, a pesquisa do gene mecA e o estudo do perfil de resistência aos antimicrobianos em cepas de S. aureus vêm sendo amplamente utilizados para estudos epidemiológicos d casos de infecção. Com a epidemiologia molecular dos genes de resistência é possível distinguir a transferência horizontal da disseminação clonal de resistência bacteriana. Dessa forma, uma abordagem voltada a saúde pública, faz-se necessária e oportuna.

Mastitis is the most important diseasesin milk cattle because it causes great disadvantages due to the production loss, expenses with medical service and remedy. Its etiology is diversified, but bacteria are the most common cause of the disease, especially Staphylococcus aureus, characterizing contagious mastitis. The disease causes problems to Public Health bacauseof the residual part of antibiotics, bacteria and toxins that can be eliminated in the milk, besides the loss caused to dairy industries. To reduce infection ratios and prevent new infection, antibiotics are used in the lactation period, whenever they are necessary, or in the dry period, when they are utilized without previous microbiological culture or antibiogram. Currently, there are detected bloodlines of Staphylococcus aureus that are multiresistant in hospital environment (HA-MRSA) as well as in the community (CA-MRSA). The resistance to antibiotics happen because of genic mutations or the acquisition of resistant genes from other bacteria, from the same species or not. Countless papers are being developed to characterize the pathogenic factors of these two kinds of bloodlines,aiming to map and keep track of the infections in humans and animals. For humans, the genic research of mecA and the profile studies of the resistance to the antimicrobiotics on S. aureus strains are being largely used to epidemiological studies in case of infection. With molecular epidemiology of resistant gens, it is possible to distinguish the horizontal transference of the clonal dissemination of the bacterial resistance. Therefore, an approach towards public health shows itself is necessary and favorable.

La mastitis es la enfermedad más importante del ganado lechero, causa daños importantes debido a la pérdida de producción, costos con servicios veterinarios y medicamentos. Su etiología es variada, pero las bacterias son las mayores causadoras de la enfermedad, especialmente Staphylococcus aureus, caracterizando mastitis contagiosa. La enfermedad causa problemas de salud pública debido a los residuos de antibióticos, las bacterias y sus toxinas pueden ser eliminadas en la leche, además del daño para la industria de lácteos. Para reducir las tasas de infección y prevenir nuevas infecciones son utilizados antibióticos, tanto en el período de lactancia, cuando sea necesario, o en la estación seca, que terminan siendo utilizados sin previa cultura microbiológica y antibiograma. Actualmente se detectan cepas multirresistentes de Staphylococcus saureus, tanto en ambiente hospitalario (HA-MRSA) como en la comunidad (CA-MRSA). La resistencia a los antibióticos se expresa debido a mutaciones de sus genes o mediante la adquisición de genes de resistencia de otras bacterias, de la misma especie o no. Innúmeros trabajos se han realizado para caracterizar los factores de patogenicidad de estos dos tipos de cepas, con el fin de mapear y rastrear las infecciones en humanos y animales. En humanos, la investigación del gene meca y el estudio del perfil de resistencia antimicrobiana en cepas de S. aureus han sido ampliamente utilizados para estudios epidemiológicos de casos de infección. Con la epidemiología molecular de los genes de resistencia es posible distinguir la transferencia horizontal de propagación clonal de resistencia bacteriana. Así, un enfoque centrado en la salud pública se hace necesario y oportuno.

Yeast mastite outbreak in a Brazilian dairy herd / Surto de mastite causado por leveduras em um rebanho brasileiro

This study aimed to describe an outbreak of bovine mastitis caused by yeast in a dairy herd located in the state of Minas Gerais, Brazil. Microbiological analysis of milk samples (106) of the infected mammary quarters of lactating cows showed that Corynebacterium bovis (43.48%) and yeasts from the genus Candida (29.35%) were the main agents isolated in the herd. C. albicans(33.34%), C. catenulate (22.23%) and C. glabrata (18.52%) were the species most commonly isolated. The high prevalence of yeast mastitis was associated with lack of training formilkers, repetitive intramammary treatment and poor teat hygiene prior to the intramammary infusion. Appropriate management measures, specific treatment with antifungal drugs and removal of chronically infected animals were effective for the control of mastitis outbreak.

O objetivo deste estudo foi descrever um surto de mastite bovina causada por leveduras em um rebanho leiteiro localizado no Estado de Minas Gerais, Brasil. Análises microbiológicas de amostras de leite (106) dos quartos mamários infectados de vacas em lactação demonstraram que Corynebacterium bovis (43,48%) e leveduras do gênero Candida (29,35%) foram os principais agentes isolados no rebanho. C. albicans (33,34%), C. catenulata (22,23%) e C. glabrata (18,52%) foram as espécies mais comumente isoladas. A elevada prevalência da mastite por leveduras foi associada à falta de treinamento dos ordenhadores, ao tratamento intramamário repetitivo e a falhas na higienização de tetas antes da infusão intramamária. Medidas adequadas de manejo, tratamento específico com drogas antifúngicas e descarte de animais cronicamente infectados foram eficazes para o controle do surto.

Registros de desempenho e de status sanitário de um rebanho bovino leiteiro no sul do Brasil / Records of performance and sanitary status from a dairy cattle herd in southern Brazil

Over the last decades, the emphasis on the health of dairy cows has changed from an individual to a herd level. In this scenario, the role played by the recording system and its interpretation by veterinarians has gained primordial importance. The records of productive and reproductive performance and of sanitary status from a southern Brazilian dairy cattle herd have been presented and discussed. The period of study was 2000-2009. Mean values per lactation period were 349D 8436M 290F 275P 201SCS (D: days in lactation, M: kg of milk yield, F: kg of fat, P: kg of protein and SCS: somatic cell score in 1000 cells/ml of milk). Major indexes of reproductive efficiency included age at first calving (31 months), services per conception (2.1), intercalving interval (428 days), calving to conception interval (146 days), mean annual rates of parturitions (76.2%), fetal losses (9.8-19.0%), and stillbirths (3.6%), apart of voluntary waiting period (94 days). Main information on sanitary status of the herd was associated with the mean prevalence of common disorders of dairy cattle such as anaplasmosis (29.8%), mastitis (27.8%), digital diseases (26.3%), ovarian cysts (21.3%), placental retention (19.7%), postpartum uterine infections (10.6%), and calf diarrhea (23.7%) and pneumonia (16.8%), among others. In addition, culling reasons (low reproductive performance [56.3%] and udder/mastitis problems [33.6%]), causes of cattle deaths (anaplasmosis [16.4%] and leukosis [11.4]), and the impact of cattle diseases such as tuberculosis, leukosis, and neosporosis on the herd have also been presented and succinctly discussed. Numbers between brackets represent rates accumulated in the 10-year period.

Nas últimas décadas, os cuidados sanitários de vacas leiteiras passaram por um processo de adaptação, no qual o enfoque individual foi substituído pelo coletivo, cujo sistema de manutenção e interpretação de registros por veterinários assumiu papel fundamental. Os registros de eficiência produtiva e reprodutiva, bem como os de ordem sanitária observados em um rebanho bovino leiteiro no Sul do Brasil foram apresentados e discutidos. O período estudado foi 2000-2009. Os dados de produção leiteira média incluíram, por período de lactação de 349 dias, 8436 kg de leite, 290 kg de gordura e 275 kg de proteína, com média de contagem de células somáticas de 201000 células/ml de leite. Idade ao primeiro parto (31 meses), serviços por concepção (2,1), intervalo entre partos (428 dias), intervalo parto-concepção (146 dias), taxas médias anuais de parição (76,2%), perdas fetais (9,8-19%) e natimortos (3,6%), além de período de espera voluntária (94 dias) foram alguns dos índices de desempenho reprodutivo registrados. Informações sanitárias do rebanho incluíram prevalência média de doenças comuns em bovinos leiteiros tais como anaplasmose (29,8%), mastites (27,8%), doenças digitais (26,3%), cistos ovarianos (21,3%), retenção de placenta (19,7%), infecções uterinas (10,6%), diarreia (23,7%) e pneumonia (16,8%) em terneiras, entre outras. Além disso, razões de descartes (baixo desempenho reprodutivo [56,3%], alterações de úbere [33,6%], etc.), causas de morte (anaplasmose [16,4%], leucose [11.4], etc.) e o impacto de doenças de bovinos como tuberculose, leucose e neosporose sobre o rebanho foram também apresentados e sucintamente discutidos...

Uso de PCR e sequenciamento do rDNA 16S para identificação de bactérias do gênero staphylococcus isoladas de mastite bovina / Identification of staphylococcus strains isolated from bovine mastitis by PCR and 16S rDNA sequencing

O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus (n=100) isoladas de mastite em rebanhos bovinos do Estado de Minas Gerais. Para esta finalidade foram utilizadas reações de PCR empregando oligonucleotídeos iniciadores descritos anteriormente para amplificar genes específicos de S. aureus (femA), S. intermedius (rDNA 16S) e S. hyicus (rDNA 16S-23S) e o sequenciamento do rDNA 16S. De acordo com as reações de PCR, 83 isolados foram identificados como S. aureus, 13 isolados como S. intermedius, dois como S. hyicus e dois isolados não foram identificados. Foram submetidos ao sequenciamento do rDNA 16S seis isolados identificados como S. aureus e os 17 restantes. Os seis isolados identificados como S. aureus confirmaram essa identificação. Dos outros 17 isolados, 13 foram identificados como S. chromogenes e quatro como S. hyicus, com similaridade igual ou superior a 99%. Baseando-se nos resultados da reação de PCR do gene femA e do sequenciamento do rDNA 16S, foram identificados 83 S. aureus, 13 S. chromogenes e quatro S. hyicus. Neste estudo os oligonucleotídeos iniciadores empregados na reação de PCR para S. intermedius não foram específicos, pois amplificaram também S. chromogenes; e os empregados na reação de PCR para S. hyicus não foram sensíveis, pois falharam na identificação de dois isolados de S. hyicus. A identificação definitiva das duas últimas espécies somente foi possível pelo sequenciamento do rDNA 16S.

The objective of this study was to identify the species of 100 isolates of Staphylococcus from mastitis in dairy cows from herds located in the state of Minas Gerais, Brazil. PCR reactions were carried out using specific primers described previously for S. aureus (femA gene), S. intermedius (16S rDNA) and S. hyicus (16S-23S rDNA spacer region). In addition, products of amplification of variable regions of the 16S rDNA gene of the strains were sequenced. According to the results of the PCR, 83 strains were identified as S. aureus, 13 as S. intermedius, two as S. hyicus and two isolates were not identified. The sequencing of 16S rDNA was applied to 23 strains identified by PCR amplifications: six S. aureus and the strains identified as S. intermedius (n=13), S. hyicus (n=2) or not identified (n=2). The sequencing of 16S rDNA confirmed the six strains as S. aureus. The others 17 strains were identified as S. chromogenes (13 isolates) and S. hyicus (four isolates). Each sample was related to a specie according to the smallest E-value and highest similarity (≥ 99%). The identification of S. hyicus and S. chromogenes was accomplished only by 16S rDNA sequencing.

Actinomicetos produtores de inibidores de beta-lactamases com atividade antimicrobiana frente a isolados de mastite bovina / Actinomycetes producers of beta-lactamases inhibitors with antimicrobial activity against microorganisms isolated from bovine mastitis

Avaliou-se a capacidade de 71 actinomicetos isolados de líquens da região amazônica em produzir inibidores de β-lactamases com atividade antimicrobiana sobre Staphylococcus aureus, resistentes à penicilina, isolados de mastite bovina do estado de Pernambuco. A seleção dos actinomicetos produtores de inibidores de β-lactamases foi realizada pela técnica de bloco de gelose contra Klebsiella pneumoniae ATCC 29665, e os actinomicetos selecionados foram testados frente a 17 linhagens de Staphylococcus aureus resistentes à penicilina. Os melhores produtores de inibidores de β-lactamases foram Streptomyces sp. DPUA 1542 e Nocardia sp. DPUA 1571, os quais foram submetidos ao cultivo submerso para determinação da curva de crescimento, pH e atividade antimicrobiana. Os maiores halos de inibição foram obtidos pelos metabólitos produzidos após 96 horas de cultivo tanto para Nocardia sp. - 13,5 e 12,0mm - como para Streptomyces sp. - 8,0 e 14,0mm - com os testes de difusão nos discos e poços, respectivamente. Os resultados permitiram concluir que os actinomicetos são fonte promissora de inibidores de β-lactamases, com potencial uso no tratamento de mastites bovinas.

The ability of 71 actinomycetes, isolated from the Amazon lichens, to produce β-lactamase inhibitors with antimicrobial activity was evaluated against penicillin-resistant Staphylococcus aureus, isolated from bovine mastitis in Pernambuco State. The selection of actinomycetes producers of β-lactamase inhibitors was performed using agar-plug method against Klebsiella pneumoniae ATCC 29665 and the selected actinomycetes were tested against 17 penicillin-resistant Staphylococcus aureus strains. The best producers of β-lactamase inhibitors were Streptomyces sp. DPUA 1542 and Nocardia sp. DPUA 1571. They were submitted to the submerged cultivation to determine the growth and pH curve, and antimicrobial activity. The highest inhibition halo zonewas obtained by metabolites produced after 96 hours of cultivation for both Nocardia sp. (13.5 and 12.0mm) and Streptomyces sp. (8.0 and 14.0mm) with discs and well diffusion tests, respectively. The results showed that the actinomycetes are a promising source of β-lactamase inhibitors, with potential for use in the bovine mastitis treatment.

Bacterias patógenas potenciales al inicio del período seco de vacas doble propósito con mastitis subclínicas / Potential pathogen bacteria during the dry period in dual purpose cows with subclinical mastitis

Los aportes científicos en el campo de la producción láctea alcanzan más de 100 años de arduo estudio, con el fin de producir la mayor cantidad de leche por vaca/año acompañado de una excelente salubridad de la glándula mamaria. Esta salud de la ubre se ha visto afectada por la inflamación del parénquima denominada mastitis causada generalmente por bacterias como los Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Corynebacterium spp., enterobacterias, entre otras. El objetivo de este trabajo fue determinar las bacterias existentes en glándulas mamarias con mastitis subclínica al inicio del período seco. Para ello se seleccionaron al azar 39 vacas mestizas doble propósito multíparas al final de la lactancia procedentes de un mismo sistema de producción, con siete meses de gestación, negativas en la prueba de fondo negro y con resultados de CMT ³ +2. Se tomaron muestras de leche para estudio bacteriológico. Se observó crecimiento bacteriano a partir de la leche de 96 cuartos mamarios (61,53%) y en la leche de 49 cuartos no hubo crecimiento (31,41%). Las bacterias más aisladas fueron el Corynebacterium bovis (46,73%), Staphylococcus epidermidis (20,56%), Staphylococcus aureus (12,15%) y Arcanobacterium pyogenes (7,48%). De acuerdo al tipo de crecimiento, se obtuvo un 88,54% de crecimiento puro y un 11,46% de crecimiento mixto y de acuerdo al potencial de patogenicidad se obtuvo un 73,82% de patógenos menores y un 18,69% de patógenos mayores. En conclusión, se identificaron las bacterias presentes en la glándula mamaria con mastitis subclínica al inicio del período seco, su distribución en cuanto a género, especie, tipo de crecimiento y potencial de patogenicidad. Asimismo, estas bacterias pueden generar mastitis clínica en el período productivo con la consecuente baja en la calidad y cantidad de leche producida.

Scientific research in milk production has been evolving over more than 100 years to attain the highest amount of milk/ cow/year along with an excellent health status of the mammary gland. This health status of the mammary gland is affected by parenchymal inflammation, i.e. mastitis, caused in general by bacteria, such as Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Corynebacterium spp. and enterobacteria. The objective of this trial was to determine the bacterias present in mammary glands with subclinical mastitis at the beginning of the dry period. Thirty nine (39) multiparous crossbred dual purpose cows at the end of the lactating period were randomly selected; they had a seven-month gestation, and they were negative at the black bottom cup test; they have a ³ +2 score at the CMT as well. Milk samples were taken for bacteriological study. Bacterial growth was observed in milk sample from 96 udder quarters (61.53%) and in milk sample from 49 quarters there was no growth (31.41%). The most frequently isolated bacteria were Corynebacterium bovis (46.73%), Staphylococcus epidermidis (20.56%), Staphylococcus aureus (12.15%) and Arcanobacterium pyogenes (7.48%). As for growth type, 88.54% of cultures were pure cultures and 11.46% were mixed cultures. As for pathogenicity potential, 73.82% of the isolates were minor pathogens and 18.69% were major pathogens. In conclusion, bacteria in mammary glands with subclinical mastitis at the dry period, their distribution as for genus and species, growth type and pathogenicity potential were identified. On other hand, these bacteria can generate clinical mastitis in the lactating period with the resulting decrease in the quality and quantity of yielded milk.

Polimorfismos de BoLA-DRB3 en el bovino sintético colombiano Lucerna y asociación con conteo de células somáticas y mastitis / BoLA-DRB3 Polymorphism in Colombian synthetic cattle Lucerna and association with somatic cell counts and mastitis

En bovinos se han determinado asociaciones de BoLA-DRB3 con enfermedades infecciosas y con el onteo de células somáticas. En este estudio fue analizada la raza sintética colombiana Lucerna, parael microsatélite DRB3 intrón 2. Fueron identificados 24 alelos por amplificación con PCR y geles de poliacrilamida, encontrando frecuencias alélicas desde 0.02 hasta 0.26. El alelo mas frecuente en la población analizada fue el 161, y el menos frecuente 159. Ambas subpoblaciones afectadas y no afectadas por mastitis, presentaron frecuencias similares para la mayoría de los alelos. La población no se encuentra en equilibrio H.W (Hardy- Weinberg). (p <0.05), y presentó déficit de heterocigóticos. El valor medio de recuento de células somáticas transformado (log2 (CCS / 100000 ) + 3), para la población total fue de 4.8 (+/- 2.89) y para cada subpoblación de afectadas y no afectadas fue de 5.76 y 3.86, respectivamente. Se estudiaron las asociaciones potenciales entre los alelos BoLA-DRB3, el recuento de células somáticas y la mastitis clínica, y se encontrando una asociación significativa (p<0.05) entre el alelo 191 con un alto conteo de células somáticas. No se encontró asociación significativa entre el alelo 191 y la enfermedad, pero si hubo significancia estadística (p<0.05) para la asociación de la mastitis con las variables hato y número de partos.

Importância do Staphylococcus aureus nas mastites subclínicas: pesquisa de enterotoxinas e toxina do choque tóxico, e a relação com a contagem de células somáticas / Importance of Staphylococcus aureus in bovine subclinical mastitis: presence of enterotoxins, shock syndrome toxin and relationship with somatic cell count

O Staphylococcus aureus é um dos principais agentes das mastites consideradas contagiosas, apresentando elevada incidência na maioria dos rebanhos leiteiros em vários países. Além de perdas econômicas é importante salientar o aspecto de saúde pública para cepas produtoras de enterotoxinas e da toxina do choque tóxico. A enterotoxina A, relacionada com maior ênfase nos casos de toxinfecções alimentares, pode ser veiculada pelo leite cru, pasteurizado e subprodutos lácteos. A síndrome do choque tóxico é determinada mais freqüentemente pela toxina do choque tóxico, porém as enterotoxinas do tipo B e C também podem ser implicadas. O objetivo deste estudo foi verificar a ocorrência de S.aureus produtores de enteroxinas e da toxina do choque tóxico em amostras de leite de animais com mastite subclínica, e correlacionar estes resultados com a contagem de células somáticas; utilizando a técnica de "celofane over agar" para detecção da TNAase, kit comercial para identificação das enterotxinas e contagem eletrônica de células somáticas. Avaliou-se 209 amostras de leite oriundas de vacas com mastite subclínica por S.aureus, e dentre estas, 209 (98,86 por cento) produziram TNAse, nove amostras (4,39 por cento) foram produtoras de enterotoxinas, sendo que uma (0,49 por cento) dentre elas foi produtora de EED, três (1,46 por cento) de EEC, e três (1,46 por cento) de EEB. Em uma amostra (0,49 por cento), detectou-se concomitantemente EEA e EEB e em outra EEB e EEC. A toxina do choque tóxico não foi encontrada nas cepas avaliadas neste estudo, assim como não houve aumento estatisticamente significativo, na contagem de células somáticas, das amostras de cepas produtoras de enteroxinas.